沈慕颜的话总是能在看似无望的境地里,指出一点可行的方向。
老吴沉默了一下,点头:“也行。死马当活马医。小孙,去准备点氢氧化钠和盐酸,浓度按……”他看向沈慕颜。
沈慕颜立刻接上:“先用05的naoh处理,再用去离子水洗至中性,接着用05的hcl平衡,最后再用平衡缓冲液充分平衡。我们一步步来,随时检测ph和电导。”
小孙听得有些咋舌,但还是麻利地应了声好,转身去准备试剂了。
老吴则开始清洗一些可能用到的玻璃层析柱和管路。
准备工作琐碎而耗时。
配制溶液,调试ph计,清洗、预处理那包古董deae-纤维素……每一步都需要耐心和细致。
沈慕颜和老吴分工合作,一个负责调配和检测,一个负责装填和冲洗,小孙则负责传递物品和记录初步参数。
过程中难免遇到问题。ph计读数不稳,需要反复校准。
预处理后的纤维素依然有些板结,流速很不理想。
连接管路的硅胶管老化,差点漏液……每当小孙有些焦躁或老吴又开始皱眉摇头时,沈慕颜总能及时发现问题所在,提出调整方案,语气始终平稳。
“孙同志,别急,ph计用之前多摇一摇,电极用标准缓冲液多浸泡一会儿。”
“吴老师,流速慢可能是因为装填太实了,我们卸掉一点,重新用悬浮液慢慢装,边装边轻轻敲击柱壁试试。”
“这根硅胶管弹性不行了,孙同志,去器材室问问有没有稍微新点的,实在不行,我们暂时用这段短的,多接几个玻璃管过渡。”
沈慕颜的冷静和专业感染了另外两人。老吴紧绷的脸色渐渐缓和,甚至在小孙又一次手忙脚乱差点打翻烧杯时,破天荒地没有斥责,只是叹了口气,说了句慢点,看着点。
小孙也在一次次实际操作中,慢慢沉下心来。
旁边连着用各种长短不一的玻璃管和硅胶管拼凑起来的管路,下面放着用于收集馏分的十几个试管,排成一列,看起来有些寒酸。
“行了,柱子算是装好了。”老吴擦了擦额头的汗,直起有些酸痛的腰:“接下来,就是把昨天分离的那点血浆上清液上样了。沈医生,你确定这柱子能挂得住凝血因子viii?别到时候蛋白全流穿了,白忙活一场。”
沈慕颜看着那根简陋的层析柱,目光沉静:“理论上,在合适的ph和离子强度下,凝血因子viii应该能结合到deae上。但我们用的填料活性未知,血浆样本也经过了几步粗处理,杂质很多。
这次实验,主要目的是验证这套我们东拼西凑的层析系统能不能跑起来,观察蛋白的洗脱行为,收集各个馏分,然后测试有没有凝血活性。哪怕只得到一丁点儿有活性的部分,就是成功。”
她总是把目标定得实际而清晰,不盲目乐观,也不轻易气馁。
“开始吧。”老吴戴上手套,示意小孙准备好记录本和笔。
沈慕颜深吸一口气,拿起那个装着经过初步离心和冷沉淀处理的血浆上清液的小烧杯,小心地、缓慢地,将其加注到层析柱顶端的样品池中。
淡黄色、略显浑浊的液体,慢慢渗入白色的填料层。
所有人的目光都紧紧盯着柱子下端出口。
一秒,两秒……淡黄色的液体开始一滴滴地,极其缓慢地,滴入第一个试管中。
“流速太慢了!”小孙忍不住低呼。
“填料阻力大,正常。”沈慕颜语气平稳:“记下开始时间,吴老师,我们准备切换平衡缓冲液,开始洗脱。”
老吴点点头,拿起另一个装着预先配好,低离子强度缓冲液的瓶子,准备在样品液全部进入填料后接上。
时间在寂静而专注的等待中一分一秒过去。
只有液体极其缓慢滴落的轻微声响,和窗外偶尔传来的风声。
简陋的层析柱,陈旧的器材,三个凑在一起、屏息凝神的人,在这间充满试剂味道的检验科里,进行着一场关乎生命希望、却又前途未卜的简陋实验。
沈慕颜的目光,紧紧追随着那缓慢移动的液体界面。
她知道,这仅仅是一个开始,后面的洗脱、收集、活性测定,每一步都充满变数。
但至少,他们迈出了这一步。
在有限的条件下,用智慧和双手,去争取那一线微光。
时间在极其缓慢的滴答声中,仿佛被拉长又压缩。
当最后一滴初始样品液完全进入填料层,老吴立刻切换上平衡缓冲液。
淡黄色的液流逐渐变得清澈透明,标志着未结合的杂质正在被洗脱。
按照沈慕颜预先设计的洗脱方案,他们开始逐步增加缓冲液中的盐离子浓度。
每更换一次洗脱缓冲液,三人的神经就绷紧一次,眼睛紧紧盯着出口处收集试管的液体颜色和体积变化。
“注意,现在切换到含01 nacl的缓冲液。”沈慕颜轻声提醒,声音在寂静的室内格外清晰。
小孙立刻在记录本上记下时间和条件。老吴的手稳稳地控制着流速调节阀,那其实只是一段可挤压的硅胶管,靠手感控制。
最初的几个馏分收集到的液体依旧清亮,几乎无色,只有用紫外分光光度计粗略检测时,才能看到微弱的吸收峰,多是些杂蛋白。
气氛有些沉闷。
小孙忍不住偷瞄沈慕颜和老吴的脸色。
老吴抿着嘴,看不出情绪。
沈慕颜则依旧专注,只是偶尔会看一眼墙上那只走得不太准的挂钟。
“切换到02 nacl。”沈慕颜再次开口。
缓冲液更换。
时间继续流逝。收集的试管已经换到了第七、第八支……
忽然,第九支试管里接到的液体,颜色似乎有了一丝极其细微的变化,不再是纯粹的无色透明,而是带上了极其淡的、几乎难以察觉的乳白或浅黄。
分量也很少,只有两三毫升。
“这个馏分……”小孙迟疑地举起试管,对着灯光看。
沈慕颜立刻走过去,接过试管,轻轻晃动,仔细观察。
“颜色有变化,体积小。”她看向老吴:“吴老师,您可以记下这个馏分编号。继续,下一个缓冲液。”
老吴点点头,眼神也亮了些许。